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Comment calculer la température de recuit

Comment calculer la température de recuit


Calcul de la température de recuit est crucial pour le succès d'une procédure de réaction en chaîne de la polymérase (PCR). C'est parce qu'un précis de la température est nécessaire pour l'amorce de l'ADN attacher à l'échantillon d'ADN. L'apprêt permet pour la réplication de l'ADN en attachant des nucléotides complémentaires à la seule ADN bicaténaire, qui effectivement se double d'un échantillon d'ADN donné, permettant un petit échantillon d'ADN doit être transformée en un échantillon assez grand pour fins d'analyse, comme dans les sciences criminelles. Tout ce processus peut échouer ou produire des résultats sous la normale si la température de recuit correcte n'est pas utilisée.

Instructions

• Trouver ou déterminer la séquence nucléotidique de l'apprêt ou amorces qui seront utilisés dans la réaction de PCR.

• Compter le nombre de chaque type de nucléotides dans la séquence d'amorçage. Par exemple dans un long simple brin de vingt nucléotides d'apprêt d'ADN il serait cinq thymine, sept adénine, cytosine quatre et quatre guanine.

• Branchez le nombre de nucléotides dans cette équation : Temp = 4 (G + C) + 2 (A + T) ° C

• Calculer après l'insertion de valeurs. T:5, A:7, c: 4, G:4 Temp = 4 (4 + 4) + 2 (7 + 5) C Temp = 32 + 24 = 13,3 degrés C Celsius

• Soustraire la température calculée de deux à cinq degrés Celsius afin de déterminer la température de recuit pour l'amorce de la réaction PCR. Ceci est nécessaire depuis le calcul dans les résultats de l'étape précédente dans la température de fusion pour une couche d'apprêt. La température de recuit d'un apprêt est généralement de deux à cinq degrés Celsius inférieure à sa température de fusion. Selon l'Université de Capetown, "il faut viser à utiliser une température de recuit (Ta) environ 5 degrés Celsius au-dessous de la Tm plus faible de la paire d'amorces à utiliser. »

• Soustraire deux à cinq degrés Celsius de l'amorce avec la température de fusion plus bas qui sera utilisée en PCR. En règle générale, deux différentes amorces sont utilisés dans la procédure PCR, il est donc essentiel de déterminer quel primer a la température de fusion plus bas afin de calculer la température de recuit.